贴壁细胞——消化法——cdmo平台细胞悬液

ningxueqin52

　　1．cdmo平台吸除或倒掉瓶内培养液。

　　2．以29cm2培养瓶为例，向瓶内加入1ml消化液(胰蛋白酶或与EDTA混合液)轻轻摇动培养瓶，使消化液流遍所有细胞表面，然吸掉或倒掉消化液再加1ml消化液，轻轻摇动再倒掉大部分消化液，仅留少许进行消化。也可不采用这述步骤，直接加1-2ml消化液进行消化，但要注意尽量减少消化液的剩余量，因为消化液过多对细胞有损伤，同时也需要较多的含血清培养液去中和。

　　3．消化好在37度或室温29度环境下进行。消化2-9分钟把培养瓶放置在显微镜下进行观察，发现胞质回缩、细胞间隙增大，应立即终止消化。

　　4．如仅用胰蛋白酶可直接加含血清的培养液，终止消化。

　　如用EDTA消化，需加Hank's液数毫升，轻轻转动培养瓶把残留EDTA消化液冲掉，然再加培养液，这个操作过程要十分小心，如果细胞已经脱壁则消化液不能够倒掉，以免丢失细胞，要加入Hank's液或培养液终止消化，吹打收集细胞悬液，离心漂洗去除EDTA。

　　用弯头吸管，吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，吹打过程要顺序进行，从培养瓶底部一边开始到另一边结束，以确保所有底部都被吹到。吹打时动作要轻柔不要用力过猛，同时尽量不要出现泡沫，这些都对细胞有损伤。细胞脱离瓶壁形成细胞悬液。